细胞背景：

密歇根癌症基金会1984年从36岁白人女性乳房组织中建立，是一种非致瘤性上皮细胞系。细胞上皮唾液黏蛋白、细胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈阳性。它们在胶原蛋白中表现出三维生长，并在融合培养物中形成圆顶。到目前为止，细胞没有显示出终末分化或衰老的迹象。该线对胰岛素、糖皮质激素、霍乱肠毒素和表皮生长因子 (EGF) 有反应。通过电子显微镜，细胞显示管腔导管细胞的特征而不是肌上皮细胞的特征。它们还表达通过与 MFA-Breast 和 MC-5 单克隆抗体的阳性反应检测到的乳腺特异性抗原。培养基中的钙含量对细胞的形态有很强的影响。

细胞信息

• 细胞名称：MCF-10A (人乳腺上皮细胞) (STR鉴定正确)
• 细胞别称：MCF 10A;MCF.10A;MCF10A;MCF10a;MCF-10 Attached;Michigan Cancer Foundation-10A
• 种属：人
• 形态特性：上皮样细胞。
• 生长特性：贴壁生长
• 组织来源：乳腺
• 细胞类型：自发永生化细胞

培养条件

• 培养基：DMEM/F12 +5% HS+20 ng/mL EGF +0.5 μg/mL Hydrocortisone+10 μg/mL Insulin+1% NEAA +1% P/S
• 培养温度：37℃。
• 气体环境：95%空气，5%CO₂。
• 培养箱湿度：70% - 80%。
• 传代比例：1:2-1:4 
• 换液频次：2-3次/周
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• STR位点:Amelogenin：X；CSF1PO：10,12；D12S391：17,20；D13S317：8,9；S16S539：11,12；D18S51：18,19；D19S433：13,15；D21S11：28,30；D2S1338：21,26；D3S1358：14,18；D5S818：10,13；D6S1043：12,18；D7S820：10,11；D8S1179：14,16；FGA：22,24；Penta E：13,14；TH01：8,9.3；TPOX：9,11；vWA：15,17； 

细胞操作

• 细胞复苏：

提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液，放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中，轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中，2000rpm 离心5分钟，弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液，用滴管轻轻吹打成单细胞悬液，避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

• 细胞传代：

1.当细胞汇合度达 80-90%，即可进行传代培养。

2.弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。

3.加 1-2 mL消化液（0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，常温或者37 ℃消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，轻轻吹打成单细胞悬液，2000 rpm 离心5 min弃去上清液。

4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 到 1:4的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。