细胞背景

由 Kathryn A. Wikenheiser 于 1992 年从人类表面活性蛋白 C 基因启动子区域控制下的 SV40 大 T 抗原转基因小鼠的肺肿瘤中建立。接种裸鼠在 6 到 9 个月内会产生肿瘤。细胞表达大 T 抗原的 mRNA。检测到肺表面活性蛋白B和C。细胞分泌磷脂以响应佛波酯和ATP，但不响应毛喉素。

细胞信息

• 细胞名称：MLE-12 小鼠肺上皮细胞 (STR鉴定正确)
• 细胞别称：MLE12；MLE-12；小鼠肺上皮细胞
• 种属：小鼠
• 形态特性：上皮样细胞
• 生长特性：贴壁生长

培养条件

• 培养基DMEM/F12＋2% FBS＋1% P/S+2% GlutaMAX-1谷氨酰胺+1% ITS（胰岛素+转铁蛋白+硒）+1%氢化可的松 +10nM雌二醇
• 培养温度：37℃。
• 气体环境：95%空气，5%CO₂。
• 培养箱湿度：70% - 80%。
• 传代比例：1:2
• 换液频次：2-3次/周

细胞操作

• 细胞复苏：

提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液，放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中，轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中，2000rpm 离心5分钟，弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液，用滴管轻轻吹打成单细胞悬液，避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

• 细胞传代：

1.当细胞汇合度达 80%，即可进行传代培养。

2.弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。

3.加 1-2 mL消化液（0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，常温或者37 ℃消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，轻轻吹打成单细胞悬液，2000 rpm 离心5 min弃去上清液。

4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。