细胞背景: Douglas Hanahan, PhD Cold Spring Harbor Laboratory 博士于 1990 年建立的来源于 RIP1Tag2 / Rip2pyST1 双转基因 C57B1/6J, 周龄 10 至 13 周小鼠的肠道肿瘤。人类肠道神经内分泌肿瘤的有用模型,也是研究激素促胰液素的有用工具。携带将大鼠胰岛素启动子(RIP)与多瘤小 T(PyST) 抗原连接的杂交基因的转基因小鼠与携带与 SV40 早期区域(Tag)相连的大鼠胰岛素启动子(RIP) 的转基因小鼠交配,产生携带两种转基因(双转基因)的后代。发现这些小鼠除了胰腺β细胞肿 瘤外还具有频繁的肠道肿瘤。基因表达研究表明,肠道和胰腺肿瘤是作为独立的实体出现的。 STC-1 细胞系产生激素促胰液素。
细胞信息
- 细胞名称:STC-1 小鼠小肠内分泌细胞 (STR鉴定正确)
- 种属:小鼠
- 形态特性:上皮样细胞。
- 生长特性:贴壁生长
培养条件
- 培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 培养温度:37℃。
- 气体环境:95%空气,5%CO₂。
- 培养箱湿度:70% - 80%。
- 传代比例:1:2-1:5
- 换液频次:2-3次/周
细胞操作
提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液,放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出,迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中,轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中,2000rpm 离心5分钟,弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液,用滴管轻轻吹打成单细胞悬液,避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中,置于二氧化碳培养箱中培养。
1.当细胞汇合度达 80-90%,即可进行传代培养。
2.弃去旧培养基,用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。
3.加 1-2 mL消化液(0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA)于培养瓶中,常温或者37 ℃消化 1-2 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出至离心管中,轻轻吹打成单细胞悬液,2000 rpm 离心5 min弃去上清液。
4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基,首次传代建议按1:2传代,后续培养可按 1:2 到 1:5的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。