细胞背景

TT细胞是从77岁女性甲状腺髓质癌患者的穿刺活检样本中建立。TT细胞持续产生高水平的降血钙素和CEA，在更换培养基后24小时和72小时在培养基中检测到的免疫活性的降血钙素浓度分别为3900 pg/百万细胞和7700 pg/百万细胞。72小时后，CEA积累浓度超过27 ng/百万细胞。

细胞信息

• 细胞名称：TT（人甲状腺癌细胞） (STR鉴定正确)
• 细胞别称：MTC-TT
• 种属：人
• 形态特性：上皮细胞样
• 生长特性：贴壁生长
• 组织来源：甲状腺；髓质；癌
• 细胞类型：肿瘤细胞
• 肿瘤类型：其他肿瘤细胞

培养条件

• 培养基：Ham's F-12K+10% FBS +1% P/S 
• 培养温度：37℃。
• 气体环境：95%空气，5%CO₂。
• 培养箱湿度：70% - 80%
• 传代比例：1:2
• 换液频次：2-3次/周
• STR:Amelogenin：X；CSF1PO：10，13；D13S317：11；D16S539：12，13；D18S51：12；D19S433：14，15；D21S11：29，32.2；D2S1338：17，23；D3S1358：15；D5S818：12，13；D7S820：10，12；D8S1179：15，16；FGA：21，25；TH01：6，9；TPOX：8，11；vWA：16，18；

细胞操作

• 细胞复苏：

提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液，放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中，轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中，2000rpm 离心5分钟，弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液，用滴管轻轻吹打成单细胞悬液，避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

• 细胞传代：

1.当细胞汇合度达 80-90%，即可进行传代培养。

2.弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。

3.加 1-2 mL消化液（0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，常温或者37 ℃消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，轻轻吹打成单细胞悬液，2000 rpm 离心5 min弃去上清液。

4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2到 1:4的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。