细胞背景

RKO细胞是一个低分化的结肠癌细胞系。RKO细胞含有野生型p53，但缺乏人甲状腺受体核受体（h-TRβ1）。RKO细胞的p53蛋白的水平高于RKO-E6细胞，RKO细胞是RKO-E6细胞和RKO-AS45-1细胞的亲本细胞系。RKO细胞在裸鼠中成瘤，且在软琼脂中形成集落。

细胞信息

• 细胞名称：RKO (人结肠腺癌细胞) (STR鉴定正确)
• 种属：人
• 形态特性：上皮样细胞
• 生长特性：贴壁生长
• 组织来源：结肠癌
• 细胞类型：肿瘤细胞
• 肿瘤类型：肠癌细胞

培养条件

• 培养基：MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S 
• 培养温度：37℃。
• 气体环境：95%空气，5%CO₂。
• 培养箱湿度：70% - 80%。
• 传代比例：1:3-1:4
• 换液频次：2-3次/周
• STR: Amelogenin：X,X；CSF1PO：8,10；D12S391：15,20；D13S317：8,11；D16S539：13,13；D18S51：11,12；D19S433：14,14；D21S11：27,30；D2S1338：16,16；D3S1358：16,19；D5S818：11,13；D6S1043：14.1,19；D7S820：8,10；D8S1179：9,13,14；FGA：20,21,22,23；Penta E：11,13；TH01：6,10；TPOX：11,11；vWA：16,22；

细胞操作

• 细胞复苏：

提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液，放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中，轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中，2000rpm 离心5分钟，弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液，用滴管轻轻吹打成单细胞悬液，避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

• 细胞传代：

1.当细胞汇合度达 80%，即可进行传代培养。

2.弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。

3.加 1-2 mL消化液（0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，常温或者37 ℃消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，轻轻吹打成单细胞悬液，2000 rpm 离心5 min弃去上清液。

4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。