R5421（又称 CY162）是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）MATα 单倍体菌株，核心用途是钾离子（K⁺）转运蛋白 / 通道 / 泵的异源功能互补鉴定。Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中正常生长，在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5mM，R5421（CY162）细胞停止生长。R5421感受态细胞经pGADT7质粒（7988bp，AmpR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

基因型：

MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64

1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴5min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的R5421感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 640 µl并吸打几次混匀，30℃水浴摇床60min。
3. 将管放42℃水浴17 min，冰浴5min，5000rmp离心5min。
4. 弃上清，加1ml YPD重悬，30°C恒温摇床1h。
5. 5000rmp离心5min去上清，1ml无菌水洗2次，离心去上清。
6. 加100ul无菌水重悬，涂相应缺陷型平板。30℃培养3-4天。