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INVSc1酵母感受态细胞

INVSc1是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）双倍体菌株，专为真核重组蛋白表达设计，是 pYES 系列载体的标准配套宿主。pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

基因型：

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 

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货号 规格 纯度
Y0027 50×100 μl
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产品基本信息

INVSc1 Chemically Competent Cell

100μl/支

-80℃（3个月）

Carrier DNA (10 μg/μl)

10μl/支

-20℃（12个月）

PEG/LiAC

6.5ml

4℃ （12个月）

存储条件

-80°

使用方法

  1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴5min，加热后快速插入冰中。
  2. 取100 µl冰上融化的INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 640 µl并吸打几次混匀，30℃水浴摇床60min。
  3. 将管放42℃水浴17 min，冰浴5min，5000rmp离心5min。
  4. 弃上清，加1ml YPD重悬，30°C恒温摇床1h。
  5. 5000rmp离心5min去上清，1ml无菌水洗2次，离心去上清。
  6. 加100ul无菌水重悬，涂相应缺陷型平板。

注意事项

注意事项：

  1. 初次使用 Carrier DNA，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。 下次使用前请于冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性Carrier DNA。 
  2. 感受态细胞最好在冰上融化。
  3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  4. 酿酒酵母对温度敏感，适宜的生长温度是 28℃-30℃，温度超过31℃影响酵母生长。
  5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢。

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