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BY4741酵母化学转化感受态细胞

BY4741 Chemically Competent Cell  100μl/支     -80℃(3个月)

Carrier DNA (10 μg/μl)               10μl/支     -20℃(12个月)

PEG/LiAC                            6.5ml        4℃ (12个月)

货号 规格 纯度
Y0021 10×100 μL

产品基本信息

BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株—S288C,是实验室的常用菌株,为配子MATa型。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4741细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA平板进行筛选。BY4741感受态细胞经pYES2质粒(5857bp,AmpR)检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

基因型:

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52

存储条件

-80°

使用方法

  1. Carrier DNA 的预处理:将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴5min,加热后快速插入冰中。
  2. 取100 µl冰上融化的BY4741感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,预处理后的Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 640 µl并吸打几次混匀,30℃水浴摇床60min。
  3. 将管放42℃水浴17 min,冰浴5min,5000rmp离心5min。
  4. 弃上清,加1ml YPD重悬,30°C恒温摇床1h。
  5. 5000rmp离心5min去上清,1ml无菌水洗2次,离心去上清。
  6. 加100ul无菌水重悬,涂相应缺陷型平板。 30℃培养3-4天。

注意事项

  1. 初次使用 Carrier DNA,请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。 下次使用前请于冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性Carrier DNA。 
  2. 感受态细胞最好在冰上融化。
  3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  4. 酿酒酵母对温度敏感,适宜的生长温度是 28℃-30℃,温度超过31℃影响酵母生长。
  5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢。