细胞背景

A-375细胞源自一位54岁女性，是由D·J·Giard等人建立的一系列细胞株中的一株。A-375细胞在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤的快速增长的皮下肿瘤；A-375在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。

细胞信息

• 细胞名称：A375（人恶性黑色素瘤细胞）(STR鉴定正确)
• 细胞别称：A 375;A375;A375-MEL;A375-mel;A375mel
• 种属：人
• 生长特性：贴壁生长
• 形态特性：上皮细胞样
• 组织来源：皮肤；恶性黑色素瘤
• 细胞类型：肿瘤细胞
• 肿瘤类型：黑色素瘤细胞

培养条件

• 培养基：DMEM +10% FBS +1% P/S 
• 培养温度：37℃
• 气体环境：95%空气，5%CO₂。
• 培养箱湿度：70% - 80%。
• 传代比例：1:3-1:6
• 换液频次：2-3次/周
• STR:Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：11，14；D16S539：9；D18S51：12，17；D19S433：13，14.2；D21S11：29，30；D2S1338：16；D3S1358：15，17；D5S818：12；D7S820：9；D8S1179：11，14；FGA：23；TH01：8；TPOX：8，10；vWA：16，17；

• 细胞复苏：

提前取出1支细胞洗涤液和1支细胞复苏液，放在37℃水浴锅中解冻。将细胞冻存管从液氮中取出，迅速置于 37℃水浴中解冻。解冻后立即将细胞悬液转移到睿必特TM洗涤液管中，轻轻混匀。将离心管置于水平离心机中，2000rpm 离心5分钟，弃去上清。再加入5-6ml睿必特TM复苏液，用滴管轻轻吹打成单细胞悬液，避免气泡。将细胞悬液转移至T25细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

• 细胞传代：

1.当细胞汇合度达 80%，即可进行传代培养。

2.弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 轻轻润洗细胞 1-2 次。

3.加 1-2 mL消化液（0.25 % Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，常温或者37 ℃消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加 5 ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，轻轻吹打成单细胞悬液，2000 rpm 离心5 min弃去上清液。

4.按 5-6 mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2-1:4 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。