BL21-CodonPlus(DE3)-RIL菌株来源于BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，可减少对外源重组蛋白的降解。BL21-CodonPlus(DE3)-RIL菌株含有pACYC质粒，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子 (AGA, AUA, CCC, CUA)对应的tRNA (argU,ileY, leuW)可提高外源基因，尤其是富含AT-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达。该菌株同时具有四环素、氯霉素抗性。其中四环素是细菌本身携带抗性。氯霉素用来维持质粒抗性。BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL 感受态细胞由pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/µg DNA。

基因型

F-ompT hsdS(rB–mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [argU ileY leuW CamR]

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 （或不含抗性的 LB 液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。