产品基本信息
本品为大肠杆菌T7 Express lysY (基因型:MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10)制作的电击感受态细胞,只能用于电击转化,不能用于热激转化。T7 Express lysY是BL21菌株的衍生菌株,广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysY是Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有 lysY质粒( lysY质粒具有氯霉素抗性),lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶,可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。可用于高质量文库构建。T7 Express lysY电击感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。
存储条件
-80℃
使用方法
1.取适量LB放37度预热1-2小时(每管感受态准备10mlLB)。
2. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
3.取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
4.用200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中(避免产生气泡),轻轻晃动使液面保持水平状态,盖上杯盖,插入冰中。
5.启动电转仪,根据仪器要求设置参数,将电击杯从冰中拿出,用吸水纸擦拭表面,吸干表面水渍,放入电转槽中,电击完成后拿出电转杯放室温,打开杯盖,15秒内加入100ul预热的LB(此步骤可在电转仪旁操作,无需在超净台操作),用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次,混匀后转移到50 ml离心管,向离心管中补加LB培养基至10 ml。37℃,220 rpm 复苏60分钟。
6.5000rpm离心一分钟收菌,留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。