产品基本信息
本品为大肠杆菌SS320(基因型:[F'proAB+lacIqlacZΔM15 Tn10 (tetR)] hsdR mcrB araD139Δ(araABC-leu)7679ΔlacX74 galUgalK rpsL thi)制作的电击感受态细胞,只能用于电击转化,不能用于热激转化。SS320来源于MC1061F-菌株,将F'因子转入MC1061F-既是SS320(也叫MC1061F´),是主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于质粒构建,蛋白表达等实验,lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内核酸酶。SS320菌株具有四环素抗性。SS320电击感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检(2686bp,AmpR)检测转化效率>1×1010 cfu/μg DNA。
存储条件
-80℃
使用方法
1.取适量LB放37度预热1-2小时(每管感受态准备10mlLB)。
2. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
3.取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
4.用200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中(避免产生气泡),轻轻晃动使液面保持水平状态,盖上杯盖,插入冰中。
5.启动电转仪,根据仪器要求设置参数,将电击杯从冰中拿出,用吸水纸擦拭表面,吸干表面水渍,放入电转槽中,电击完成后拿出电转杯放室温,打开杯盖,15秒内加入100ul预热的LB(此步骤可在电转仪旁操作,无需在超净台操作),用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次,混匀后转移到50 ml离心管,向离心管中补加LB培养基至10 ml。37℃,220 rpm 复苏60分钟。
6.5000rpm离心一分钟收菌,留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。