产品基本信息
本品为大肠杆菌ClearColi K12（基因型：F–λ–∆endA–∆recA–frr181 msbA52 ∆gutQ ∆kdsD ∆lpxL ∆lpxM ∆pagP ∆lpxP ∆eptA）制作的电击感受态细胞，只能用于电击转化，不能用于热激转化。ClearColi K12菌株来源于K12 endA- recA-菌株。在K12 endA- recA-菌株中引入突变，导致ClearColi K12细胞壁外层的脂多糖（LPS）被修饰:LPS的低聚糖链被删除，同时LPS的两个酰基链也被删除，进而破坏了ClearColi K12大肠杆菌的内毒素信号通路，使得从该细胞中提取的蛋白或质粒DNA中的内毒素含量极低，提取的无内毒素质粒广泛应用于哺乳动物细胞转化。ClearColi K12同时缺失核酸内切酶 (endA)和重组酶 (recA)，提高了质粒DNA的产量和质量。ClearColi K12电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
存储条件
-80℃
使用方法
1.取适量LB放37度预热1-2小时（每管感受态准备10mlLB）。
2.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3.取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
4.用200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。
5.启动电转仪，根据仪器要求设置参数，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，15秒内加入100ul预热的LB（此步骤可在电转仪旁操作，无需在超净台操作），用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到50 ml离心管，向离心管中补加LB培养基至10 ml。37℃，220 rpm 复苏60分钟。
6.5000rpm离心一分钟收菌，留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。
