产品基本信息
本品为大肠杆菌Stbl3(基因型:F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (StrR) xyl-5 λ-leu mtl-1 endA1+)制作的电击感受态细胞,只能用于电击转化,不能用于热激转化。Stbl3菌株来源于HB101 E. coli strain,是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染。Stbl3具有链霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝白斑筛选。适合慢病毒质粒文库或逆转录质粒文库的构建。Stbl3电击感受态经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>1×1010 cfu/μg DNA。
存储条件
-80℃
使用方法
1.取适量LB放37度预热1-2小时(每管感受态准备10mlLB)。
2. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
3.取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
4.用200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中(避免产生气泡),轻轻晃动使液面保持水平状态,盖上杯盖,插入冰中。
5.启动电转仪,根据仪器要求设置参数,将电击杯从冰中拿出,用吸水纸擦拭表面,吸干表面水渍,放入电转槽中,电击完成后拿出电转杯放室温,打开杯盖,15秒内加入100ul预热的LB(此步骤可在电转仪旁操作,无需在超净台操作),用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次,混匀后转移到50 ml离心管,向离心管中补加LB培养基至10 ml。37℃,220 rpm 复苏60分钟。
6.5000rpm离心一分钟收菌,留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。