产品中心product center

Fast-T1感受态细胞

货号 规格 纯度
EE042-H-S 10×100 μL

产品基本信息

Fast-T1是目前生长速度最快的感受态细胞。外膜受体突变(tonA)赋予感受态细胞对裂解噬菌体T1和T5的抗性;缺失核酸内切酶(endA)提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA)减少了插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;lacZΔM15使Fast-T1感受态细胞可用于蓝白斑筛选。pUC19质粒转化Fast-T1感受态细胞,转化效率>10 8 cfu/μg。

基因型

F- φ80 (lacZ) ΔM15 ΔlacX74 hsdR (rK-,mK+ ) ΔrecA1398 endA1 tonA

存储条件

-80℃(12个月)

使用方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中,待感受态细胞解冻后,加入连接产物(连接产物的体积不应超过感受态体积的1/10)或加入需扩增的质粒1-2ul,轻弹使混合均匀,并在冰中静置30min;

2. 置42℃水浴锅中热激60 s,立即插入冰中静置2-3 min;

3. 在离心管中加900 μL不含抗性的 LB液体培养基,置37℃摇床220 rpm复苏60 min;

4. 5000rpm离心1-2min收集菌体,留100ul上清重悬菌体并均匀涂布抗性LB平板,37℃培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。