本品为大肠杆菌W3110(DE3){基因型：F- λ- rph-1 INV(rrnD, rrnE)(DE3)(CamR) }制作的感受态。该菌种是K-12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的大肠杆菌工程菌株，基因组与MG1655菌株高度相似（与MG1655基因组相比，有8个位点的基因突变）。W3110(DE3)菌株在液体培养时可耐受更高的菌体浓度，同时蛋白产量明显高于其他原核表达菌株，可作为蛋白表达的宿主菌株使用，提高菌体和蛋白产量。W3110(DE3)菌株染色体整合DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，W3110(DE3)菌株具有氯霉素抗性，不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的 质粒被降解。W3110(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。

-80℃

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻
弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加 900 μL 900 μL 睿必特
TM E.coli 快速复苏液 （或是不含抗性的 LB
液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂
布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。