产品基本信息
本品为大肠杆菌T7 Express lysY{基因型:MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10}制作的感受态。该菌种是BL21菌株的衍生菌株,广泛用于蛋白的原核表达。T7 Express lysY是Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有lysY质粒( lysY质粒具有氯霉素抗性),lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶,可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。T7 Express lysY感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。
存储条件
-80℃
使用方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中 5 min,加入目的质粒 1-2ul,轻
弹使混合均匀,并在冰中孵育 30min;
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s,立即插入冰中静置 2-3 min;
3. 添加 900 μL 900 μL 睿必特
TM E.coli 快速复苏液 (或是不含抗性的 LB
液体培养基),37℃摇床 220 rpm 培养 60 min;
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂
布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上,37℃培养箱放置过夜。