本品为大肠杆菌SHuffle T7 E. coli{基因型：F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxBrpsL150(StrR)Δgor Δ(malF)3}制作的感受态。该菌株是K12的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶DsbC基因，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E.coli菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA聚合酶基因，可以表达噬菌体T7 RNA聚合酶，适合于T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E.coli菌株具有抗 T1噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。SHuffle T7 E.coli感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

-80℃

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻
弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加 900 μL 900 μL 睿必特
TM E.coli 快速复苏液 （或是不含抗性的 LB
液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂
布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。