BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。BL21(DE3)感受态细胞转化pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒1-2ul，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加 900 μL睿必特TM E.coli快速复苏液 （或是不含抗性的 LB液体培养基），37℃摇床220 rpm培养60 min；

4.  5000 rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB平板上，37℃培养箱放置过夜。