BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。BL21(DE3)感受态细胞转化pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 （或不含抗性的 LB 液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。