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ArcticExpress (DE3) pRARE2 化学转化感受态细胞

货号 规格
EE002-H-S 10×100 μL 价格:340元

产品基本信息

ArcticExpress (DE3) pRARE2来源于ArcticExpress (DE3),将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四环素,庆大霉素,氯霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时,pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108cfu/μg DNA。

基因型

  1. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)

存储条件

-80℃(12个月)

使用方法

  1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中 5 min,加入目的质粒 1-2ul,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育 30min。
  2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s,立即插入冰中静置 2-3 min。
  3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 (或不含抗性的 LB 液体培养基),37℃摇床 220 rpm 培养 60 min。
  4. 5000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上,37℃培养箱放置过夜。

注意事项

  1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
  2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
  3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。