ClearColi BL21(DE3)来源于BL21(DE3)，在BL21(DE3)中引入8个独立基因突变，导致ClearColi BL21(DE3)细胞壁外层的脂多糖（LPS）被修饰，LPS的低聚糖链被删除，同时LPS的两个酰基链也被删除，破坏了ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌的内毒素信号通路；正常的LPS含有六个酰基链，含有六个酰基链的LPS可以被受体TLR4识别，激活内毒素反应，而只含有四个酰基链的LPS不能被TLR4识别，因此不触发内毒素反应。 从ClearColi BL21(DE3)细胞中提取的蛋白或质粒DNA中的内毒素含量极低，提取的无内毒素蛋白或多肽广泛应用于哺乳动物试验，疾病治疗等。ClearColi BL21(DE3)同时为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解，提高了目标蛋白的稳定性和表达量。 λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于ClearColi BL21(DE3)的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ClearColi BL21(DE3)感受态细胞由pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。

基因型

F- ompT hsdSB(rB-mB- ) gal dcm lon λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]) msbA148 ΔgutQ ΔkdsD ΔlpxL ΔlpxM ΔpagP ΔlpxP ΔeptA

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 （或不含抗性的 LB 液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。