本品为大肠杆菌 Rosetta-gami 2(DE3)pLysS [基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F ´

[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

]制作的高效感受态。该菌株聚合了不同原核表达菌株的优点：＊Rosetta-gami2 赋予其 Rosetta2 和Origami2 的优点——补充大肠杆菌缺乏的7 种稀有密码子

(AUA, AGG, AGA,CUA, CCC, GGA, CGG)对应的 tRNA，提高外源基因的表达水 平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase) (trxB)和谷胱甘肽还 原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有 利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。＊该菌株染色 体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶)适合 T7 启动子诱 导的蛋白表达。＊该菌株携带的 pLysS 质粒含有表达 T7 溶菌酶的基因，能够降 低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达，适合表达毒性蛋白和 非毒性蛋白。Rosetta-gami2(DE3)pLysS 菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性， 为亮氨酸生长缺陷型菌株。Rosetta-gami 2(DE3)pLysS  感受态细胞由特殊工艺制 作，pUC19  质粒（2686bp ，AmpR）检测转化效率>107  cfu/μg DNA。

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻 弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；

2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；

3. 添加 900 μL 900 μL 睿必特 TM E.coli 快速复苏液 （或是不含抗性的 LB 液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；

4.   5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂 布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。