Rosetta-gami 2(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表达菌株的优点：Rosetta-gami 2具有Rosetta2和Origami两个菌的优点——补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA, CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增加蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因背景的表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami 2(DE3)pLysS 菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞由pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。

基因型

Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中 5 min，加入目的质粒 1-2ul，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育 30min；
2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s，立即插入冰中静置 2-3 min；
3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 （或不含抗性的 LB 液体培养基），37℃摇床 220 rpm 培养 60 min；
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上，37℃培养箱放置过夜。