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DH5α 化学转化感受态细胞

货号 规格 纯度
EC007H-S 10×100 μL

产品基本信息

本品为大肠杆菌DH5α(基因型:F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA)制作的高效感受态,广泛用于基因克隆、质粒转化等试验,可用于蓝白斑筛选(含lac ZΔM15),pUC19 质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。该菌缺失核酸内切酶 (endA1),提高了质粒DNA 的产量和质量;重组酶(recA1)缺陷型,减少插入片段发生同源重组的概率。

存储条件

-80°

使用方法

 

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒1-2ul,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;

2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;

3. 添加 900 μL睿必特TM E.coli快速复苏液 (或是不含抗性的 LB液体培养基),37℃摇床220 rpm培养60 min;

4.  5000 rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB平板上,37℃培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。