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DH10Bac  化学转化感受态细胞

货号 规格 纯度
EC006H-S 10×100 μL

产品基本信息

本品为大肠杆菌DH10Bac [基因型:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsnupG /pMON14272 / pMON7124]制作的高效感受态。DH10Bac 菌株主要用于生产重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统)。该菌株中含有父本杆粒bMON14272 、辅助质粒 pMON7124 :父本杆粒 bMON14272 包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和lacZα互补因子;辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区(tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid),具有四环素抗性,在细胞扩增过程中丢失,但可提高供体质粒pFastBac(具有庆大霉素抗性)转化后的基因转座效率。mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZΔM15 的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选;pUC19 质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

存储条件

-80℃

使用方法

供体质粒(pFastBac 等)转化重组方法: 1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入供体质粒(pFastBac 等)1 ng,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min; 2. 放42℃水浴锅中热激45s,立即插入冰中静置2-3 min; 3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养4 h; 4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,平板包含 50ug/ml Kan,7ug/ml Gentamicin,7ug/ml tetracycline,40ug/ml X-gal,40ug/ml IPTG,37℃培养箱放置48 h。 pUC19 检测转化效率方法: 1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min; 2. 放42℃水浴锅中热激45s,立即插入冰中静置2-3 min; 3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养1 h; 4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。 2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。