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Lemo21(DE3) 化学转化感受态细胞

货号 规格
AT015-H-M 50×100 μL 价格:1530元

产品基本信息

Lemo21(DE3)菌株适用于毒性蛋白,膜蛋白,及其他容易形成包涵体的蛋白的原核表达;缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,减少对重组蛋白的降解;fhuA2突变赋予Lemo21(DE3)菌株对噬菌体T1的抗性。 大肠杆菌中的膜蛋白表达和输出都受到 Sec 转位酶转运能力的限制,如果T7 RNA聚合酶的活力过高,超过Sec转位酶的转运能力,会导致蛋白毒性产生或包涵体的形成,pLemo质粒(具有氯霉素抗性)含有一个鼠李糖诱导的T7溶菌酶表达框 ,可以高效表达T7溶菌酶,T7溶菌酶是T7 RNA聚合酶的抑制剂,可抑制T7 RNA聚合酶的转录活性,降低目标蛋白的合成速度,减少包涵体的形成,提高毒性蛋白,膜蛋白,及其他容易形成包涵体的蛋白的原核表达成功率。Lemo21(DE3)可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Lemo21(DE3)感受态细胞由pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>107 cfu/μg DNA。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS / pLemo(CamR)

存储条件

-80℃(12个月)

使用方法

  1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中 5 min,加入目的质粒 1-2ul,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育 30min;
  2. 放 42℃水浴锅中热激 90 s,立即插入冰中静置 2-3 min;
  3. 添加900ul睿必特 TM E.coli 快速复苏液 (或不含抗性的 LB 液体培养基),37℃摇床 220 rpm 培养 60 min;
  4. 5000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μ l 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 平板上,37℃培养箱放置过夜。

注意事项

  1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
  2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
  3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。